Western Blotting Handbook and Troubleshooting Guide

Introduction. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Western Blotting Overview . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2-3
Transfer Protein to a Membrane . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
MemCode™ Protein Stains. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-5
Blocking Nonspecific Binding Sites. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
Transfer Buffers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
Transfer Membranes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
Blocking Buffer Optimization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
Blocking Buffers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8-9
Washing the Membrane. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
Wash Buffers. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
Primary and Secondary Antibodies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
Conjugate Stabilizer Solutions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
Affinity-Purified Secondary Antibodies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13-15
Labeling Your Own Antibodies . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
ImmunoPure Enzymes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
EZ-Link Activated Enzymes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18-19
EZ-Label Fluorescent Labeling Kits . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
Optimizing Antibody Concentration. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21-22
Chromogenic Substrates . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23-24
Chemiluminescent Substrates . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25-31
SuperSignal Chemiluminescent Substrates . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26-30
LumiPhos Chemiluminescent Substrate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
Quick Reference Substrate Guide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
Data Imaging . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
CL-XPosure Film. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
Western Blot Detection Kit. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
Far-Western Blotting. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35-36
In-Gel Western Detection . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37-39
Optimizing the Signal-to-Noise Ratio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
Restore Western Blot Stripping Buffer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
Qentix Western Blot Signal Enhancer. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Erase-It Background Eliminator . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44-45
Troubleshooting Guide – Blotting with Chemiluminescence . . . . . . . . . . . . . 46-49
Western Blotting Protocol Using Chemiluminescent Substrates . . . . . . . . . . 50-51

Last update 28-Sep-2005, Rating Poor of 5 votes.